Lactate dehydrogenase-elevating virus (LDV) has a strict species-specificity. Because only a subset of mouse primary macrophages have been identified that can support LDV replication in vitro, the precise molecular mechanism of viral entry and replication remains unclear. To analyze the LDV envelope proteins, which probably mediate viral attachment to the host cell, we developed a mammalian system for stable co-expression of LDV open reading frame (ORF) 5- and ORF 6-encoded proteins (ORF 5 and ORF 6 proteins), which correspond to envelope VP-3 and M/VP-2, respectively, and compared these expressed proteins to the native ones. Western blotting analysis combined with N-glycanase digestion revealed that ORF 5 and ORF 6 proteins were similar in size to native VP-3 and M/VP-2, and that ORF 5 protein was N-glycosylated, like the native VP-3. Immunofluorescence microscopy revealed that both ORF 5 and ORF 6 proteins were distributed throughout the cytoplasm and were colocalized in most cells. Moreover, ORF 5 protein was localized both in the perinuclear region and the Golgi complex and transported to the cell surface. This mammalian expression system in which the exogenously expressed proteins closely resemble the native proteins will provide the experimental basis for further studies of the interactions between LDV envelope proteins and host cells.
Le virus d'élévation de la lactate déshydrogénase (LDV) a une spécificité d'espèce très stricte. La reproduction in vitro du LDV n'étant pour l'instant possible que dans les macrophages primaires d'un sous-groupe de souris, le mécanisme moléculaire de pénétration et de reproduction virale précis est mal connu. Pour analyser les protéines de l'enveloppe du LDV, qui fixe probablement une médiat viral sur la cellule hôte, nous avons développé un système mammifère pour une co-expression stable des protéines codées 5 et codées 6 du cadre ouvert de lecture du LDV (protéines de l'ORF 5 et de l'ORF 6), correspondant respectivement aux enveloppes VP-3 et M/VP-2, puis nous avons comparé les protéines ainsi exprimées aux protéines natives. L'analyse du transfert de type Western combinée à la digestion du N-glycanase a montré que les protéines de l'ORF 5 et de l'ORF 6 étaient de taille similaire aux protéines natives VP-3 et M/VP-2 et que la protéine de l'ORF 5 était N-glycosylée, comme la VP-3 native. L'examen microscopique immunofluorescent a montré que les protéines de l'ORF 5 et de l'ORF 6 étaient distribuées dans tout le cytoplasme et colocalisées dans la plupart des cellules. De plus, la protéine de l'ORF 5 a été localisée à la fois dans la région périnucléaire et dans l'appareil de Golgi, puis transportée à la surface. Ce système d'expression mammifère dans lequel des protéines à expression exogène ressemble de très près aux protéines natives permet de fournir une base expérimentale pour les futures études des interactions entre les protéines de l'enveloppe du LDV et les cellules hôtes.