The purpose of this pilot study was to detect the presence of interleukin-8 (IL-8) and the potential downstream effects of IL-8 receptor activation in 2 previously characterized feline oral squamous cell carcinoma cell lines (SCCF1 and SCCF2). Interleukin-8 messenger RNA (mRNA) was initially detected by quantitative reverse transcription polymerase chain reaction (qRT-PCR). A previously validated and commercially available enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) test was used to measure IL-8 production in the supernatant of the 2 cell lines. Western blot was used to detect phosphorylation of proteins (AKT, ERK1/2, JAK2, STAT3, and Src), known to be downstream of interleukin-8 receptor activation. The IL-8 receptor-specific antagonists, Reparixin and SCH527123, were used to identify effects on phosphorylation of these proteins. Interleukin-8 mRNA and protein were detected in both SCCF1 and SCCF2 by RT-PCR and ELISA, respectively. Phosphorylation of ERK1/2, STAT3, and Src was detected in both cell lines. Inhibition of the IL-8 receptor led to a decrease in phosphorylation of Src, but not ERK1/2 or STAT3. In conclusion, feline squamous cell carcinoma cell lines can produce IL-8. Phosphorylation of Src seems, at least in part, a consequence of IL-8 receptor activation. The phosphorylation of ERK1/2 and STAT3, although present, seems independent of IL-8 receptor activation. Due to its potential effects on the tumor microenvironment, in addition to its autocrine effects on Src phosphorylation, the inhibition of the IL-8 receptor may become a beneficial therapeutic tool. Evaluation of the presence of both IL-8 and Src in many cases should elucidate their importance.
Le but de cette étude pilote était de détecter la présence d’interleukine-8 (IL-8) et les effets potentiels en aval de l’activation du récepteur IL-8 dans deux lignées cellulaires de carcinome épidermoïde oral félin (SCCF1 et SCCF2) précédemment caractérisées. L’ARN messager de l’interleukine-8 (ARNm) a été initialement détecté par amplification en chaîne par la polymérase à transcription inverse quantitative (qRT-PCR). Un test immuno-enzymatique ELISA précédemment validé et disponible dans le commerce a été utilisé pour mesurer la production d’IL-8 dans le surnageant des deux lignées cellulaires. L’immunobuvardage a été utilisé pour détecter la phosphorylation des protéines (AKT, ERK1/2, JAK2, STAT3 et Src), connues pour être en aval de l’activation du récepteur de l’interleukine-8. Les antagonistes spécifiques du récepteur IL-8, Reparixin et SCH527123, ont été utilisés pour identifier les effets sur la phosphorylation de ces protéines. L’ARNm et la protéine de l’interleukine-8 ont été détectés dans SCCF1 et SCCF2 par RT-PCR et ELISA, respectivement. La phosphorylation de ERK1/2, STAT3 et Src a été détectée dans les deux lignées cellulaires. L’inhibition du récepteur IL-8 a conduit à une diminution de la phosphorylation de Src, mais pas ERK1/2 ou STAT3. En conclusion, les lignées cellulaires de carcinome épidermoïde félin sont capables de produire de l’IL-8. La phosphorylation de Src semble, au moins en partie, une conséquence de l’activation du récepteur IL-8. La phosphorylation de ERK1/2 et STAT3, bien que présente, semble indépendante de l’activation du récepteur IL-8. En raison de ses effets potentiels sur le micro-environnement tumoral, en plus de ses effets autocrines sur la phosphorylation de Src, l’inhibition du récepteur IL-8 peut devenir un outil thérapeutique bénéfique. L’évaluation de la présence à la fois d’IL-8 et de Src dans un grand nombre de cas devrait élucider leur importance.(Traduit par Docteur Serge Messier).
Copyright and/or publishing rights held by the Canadian Veterinary Medical Association.