Background: Sputum induction is a tool recommended for the assessment of airway inflammation and disease management. Currently, its use is limited because samples need to be processed within 3 h of induction (ie, while cells are viable); therefore, this procedure is unavailable to most clinicians.
Objective: To develop a fixation method for induced sputum samples that allows for a delay in processing while maintaining sample integrity and not altering the standard processing method.
Methods: Sputum samples were collected and split into three portions: a fresh sample processed using the routine method (within 3 h, using dithiothreitol); fixation in alcohol followed by delayed processing using the routine method (within 48 h to 72 h, using dithiothreitol); and fixation in formaldehyde followed by delayed processing using an alternative method (within 48 h to 72 h, using proteolysis). For each method, cytospins were prepared and differential cell counts were performed.
Results: Fixation in alcohol provides accurate measures of eosinophils and macrophages, but not neutrophils. Formaldehyde fixation provides accurate measures of neutrophils and macrophages, but not eosinophils.
Discussion: Alcohol fixation is a superior method for eosinophil quantification. It requires alteration of standardized methods for sputum sample processing and should be recommended for monitoring eosinophilic airway disease in settings where immediate processing of a sputum sample is not possible.
HISTORIQUE :: L’induction des expectorations est recommandée pour évaluer l’inflammation des voies aériennes et prendre en charge la maladie. Son utilisation est toutefois limitée car il faut traiter les échantillons dans les trois heures suivant l’induction (c’est-à-dire pendant que les cellules sont viables). Par conséquent, la plupart des cliniciens ne disposent pas de cette intervention.
OBJECTIF :: Mettre au point une méthode de fixation des échantillons d’expectoration induite pour en retarder le traitement tout en en conservant l’intégrité et en évitant de modifier la méthode de traitement standard.
MÉTHODOLOGIE :: Les chercheurs ont colligé des échantillons d’expectoration et les ont divisés en trois parties : un échantillon frais traité au moyen de la méthode habituelle (dans les trois heures, au moyen du dithiothréitol), la fixation dans l’alcool suivie d’un traitement retardé selon la méthode habituelle (dans les 48 à 72 heures, au moyen du dithiothréitol) et la fixation dans du formaldéhyde suivie d’un traitement retardé au moyen d’une autre méthode (dans les 48 à 72 heures au moyen de la protéolyse). Pour chaque méthode, on a préparé les cytospines et effectué une formule leucocytaire différentielle.
RÉSULTATS :: La fixation dans l’alcool fournit des mesures précises des éosinophiles et des macrophages, mais pas des neutrophiles. La fixation dans le formaldéhyde assure des mesures précises des neutrophiles et des macrophages, mais pas des éosinophiles.
EXPOSÉ :: La fixation dans l’alcool est une méthode supérieure de quantification des éosinophiles. Elle exige de modifier les méthodes standardisées de traitement d’échantillons d’expectoration et devrait être recommandée pour évaluer les maladies à éosinophiles des voies aériennes dans les milieux où il n’est pas possible de procéder au traitement immédiat d’un échantillon d’expectoration.